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液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定蔬菜和水果中的煙酰胺單核苷酸

發(fā)布日期:2022-12-19 9:09:37 瀏覽次數(shù):63

B-煙酰胺單核苷酸(NMN)是人體內(nèi)一種內(nèi)源性物質(zhì),由于煙酰胺在煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的催化下生成,隨后NMN又在煙酰胺單核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶的催化下生成NAD+(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)。近期在研究NMN的相關(guān)作用在醫(yī)藥保健品方面的開(kāi)發(fā)應(yīng)用。質(zhì)譜定量具有靈敏度高、選擇性好等特點(diǎn),可以有效降低基質(zhì)干擾帶來(lái)的測(cè)定誤差。鑒于NMN諸多的保健治療作用,測(cè)定蔬菜、水果中NMN的含量具有重要的實(shí)用價(jià)值和意義。

1 儀器、試劑與材料

儀器:4000Qtrap串聯(lián)三重四級(jí)桿線性離子阱質(zhì)譜儀、LC-20AD高效液相色譜儀、Milli-pore超純水儀、超聲波萬(wàn)分之一天平、蠕動(dòng)泵

試劑:甲醇超純水、nmn標(biāo)準(zhǔn)品乙酸、1ml醫(yī)用注射器、0.22um微孔濾頭

材料:牛油果、西蘭花、卷心菜

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2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品制備

將牛油果、西蘭花、卷心菜切成小塊,精確稱取3.5g左右(分別取2個(gè)做平行樣),加入5ml、50%的甲醇水溶液,超聲萃取30min,用1ml醫(yī)用注射器取上清,經(jīng)0.22um過(guò)濾頭過(guò)濾后立即上機(jī)測(cè)試。

2.2 儀器條件

色譜條件:島津ngShim-pack VP-ODS150Lx2.0,50um)色譜柱,樣品室為室溫。流動(dòng)相:A0.1%的乙酸水溶液,B為含2mmol/L醋酸銨的甲醇溶液,流速為0.3ml/min,柱溫40℃,進(jìn)樣量為10ul.梯度洗脫條件見(jiàn)下表:

時(shí)間/分鐘

A

B

0

95

5

3

65

35

5

0

100

8.1

5

95

12

程序結(jié)束

質(zhì)譜條件:采用電噴霧離子源,在正離子電離模式下選用多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)掃描模式進(jìn)行定量分析;點(diǎn)噴霧電壓5500V,離子源溫度為500℃,離子源輔助氣GSI/GS2氣流均為50L/h

3 結(jié)果與分析

3.1 進(jìn)行質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化

3.2 進(jìn)行色譜條件優(yōu)化

3.3 樣品前處理方法的優(yōu)化

精確稱取3.5g卷心菜10份,分別加入5ml超純水、20%甲醇水溶液、50%甲醇水溶液、80%甲醇水溶液、100%甲醇水溶液(2個(gè)重復(fù)),分別在15、3045、60、75min50uL上清液進(jìn)行分析(進(jìn)針2次)。結(jié)果表面:每種試劑都是在0~30min區(qū)間NMN含量逐漸升高,45min后有不同程度的下降,60min后含量基本保持穩(wěn)定;其中在0%~50%甲醇含量區(qū)間,隨甲醇含量升高同一時(shí)間NMN萃取效率逐漸升高;甲醇含量超過(guò)50%以后,萃取效率沒(méi)有明顯升高;30min以后NMN含量因降解開(kāi)始下降,萃取試劑含水量越高,NMN降解速度越快,甲醇含量越高降解曲線越平穩(wěn);但是甲醇含量越高,基質(zhì)干擾越嚴(yán)重,因此綜合考慮選用50%甲醇水溶液超聲萃取30min的前處理方法。

3.4 方法學(xué)考察

3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及方法的檢出限、定量限

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制后,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性方程y=21200x-23800(R=0.998),在0.143~228ug/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.4.2 精密度實(shí)驗(yàn)

28.5ug/LNMN標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣5次,結(jié)果平均值為28.24ug/L,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.2%。

3.4.3 回收率

利用空白添加計(jì)算回收率。經(jīng)計(jì)算NMN的回收率為86.6%~108%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.4%。

3.5 實(shí)際樣品檢測(cè)

分別稱取牛油果、卷心菜和西蘭花鮮樣3.5g2個(gè)重復(fù)),經(jīng)2.1節(jié)方法處理后,在2.2節(jié)儀器條件下上機(jī)測(cè)試,由標(biāo)準(zhǔn)曲線定量得到每100g牛油果、卷心菜和西蘭花鮮樣中NMN的含量分別為6.519ug4.091ug、2.30ug

4 結(jié)論

文中介紹的蔬菜、水果中NMN的測(cè)定方法,具有快速、靈敏、選擇性高等特點(diǎn);前處理簡(jiǎn)單,不需要提純、濃縮等步驟,不僅可以為蔬菜、水果的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值分析及藥用價(jià)值開(kāi)發(fā)研究提供技術(shù)支持,還可以為人們?nèi)粘I攀碃I(yíng)養(yǎng)搭配和病人食療保健提供理論指導(dǎo)。

文獻(xiàn)

[1] 李東芹.液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定蔬菜和水果中的煙酰胺單核苷酸[J].實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理,2019,36[9]:57-59.

 

 


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